在真核细胞（哺乳动物细胞）和原核细胞（细菌）中，细胞增殖与细胞死亡之间的平衡对于维持细胞的有机发育和生命至关重要。失衡可能导致各种疾病。活细胞和死细胞的状态是研究生物增殖和生长时的常见研究重点。例如，在真核细胞中，通过特定仪器分析细胞膜的完整性和细胞内酯酶活性来确定细胞状态，为研究细胞状态和分析活细胞与死细胞以评估细胞活力提供了方便的方法。它可应用于大多数真核哺乳动物细胞，但不适合真菌和酵母。主要用于药物研究、毒性测定和细胞生长状态研究。

Arcegen Biology精心开发了一种适用于真核细胞和原核细胞的双重染色检测试剂盒，以满足您的研究需求。

检测原理

1. 细胞染色

Calcein-AM是一种常用的活细胞荧光染色试剂，它在被细胞摄取后，由细胞内的酯酶催化去乙酰化，形成带负电荷的Calcein，该分子不能透过细胞膜，因此会在细胞内累积并发出强绿色荧光（激发波长约为490纳米，发射波长约为515纳米）。Calcein-AM本身是非荧光的，只有在细胞内经过酯酶作用后才会发光，因此它非常适合用于活细胞的标记，且细胞毒性极低。

由于死细胞缺乏酯酶活性，Calcein-AM主要用于活细胞的短期标记和细胞活性测试。因此，Calcein-AM常与能够染色死细胞的荧光染料如碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）联合使用，以实现活细胞和死细胞的同时荧光双重染色。PI能够穿过死细胞膜的无序区域，与DNA结合后发出红色荧光（激发波长约为535纳米，发射波长约为617纳米），因此可以用于死细胞的染色。

这种双重染色方法使得研究人员能够在荧光显微镜下同时观察活细胞（绿色荧光）和死细胞（红色荧光），从而评估细胞的生存状态。这种染色方法适用于大多数真核细胞，包括贴壁细胞和某些组织样本，但不包括细菌和酵母样本。Calcein-AM和PI的双重染色方法广泛应用于药物研究、毒性测定和细胞生长状态研究等领域。
 

2. 细菌染色

荧光染料DMAO是一种绿色的核酸荧光染料，能够染色活细菌和死细菌。EthD-III是一种红色的核酸荧光染料，只能染色那些细胞膜受损的死细菌。当DMAO和EthD-III混合使用进行染色时，具有完整细胞膜的细菌会呈现绿色，而细胞膜受损的细菌则会同时呈现绿色和红色。这些结果可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行分析，并且适用于大多数类型的细菌。

应用检测

1. 细胞染色结果

注意：细胞类型 = A375黑色素瘤细胞，Calcein-AM = 2 μM，PI = 4.5 μM，染色时间 = 15分钟

A是Calcein-AM染色图像，B是PI染色图像，C是合并图像。
 

2. 细菌染色结果

注意：细胞类型 = 大肠杆菌，EthD-III = 2 μl，DMAO = 4 μl，染色时间 = 15分钟。

A是EthD-III染色图像，B是DMAO染色图像，C是合并图像。
 

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